小鼠8细胞期胚胎超低温(一196。C)冷冻保白琴华(中国科学皖遗传研究听实验动物中心，北京)1972年Whittingham和Wilmut在超低温条件下冷冻保存小鼠早期胚胎分别取得成功。由于这项工作的理论意义和实用价值，国际上一些实验室相继开展了研究工作。迄今，家兔、羊和牛早期胚胎冷冻保存都已成功，其中牛的胚胎冷冻已发展到商业规模。用胚胎冷冻保存技术保存小鼠近交系、突变系等遗传资源有其特殊意义，因而受到普遍重视。用这一方法维持重要品系可以避免因意外事件造成遗传资源丢失和遗传污染，可减轻由于日益增加的近交系、突变系数量给繁育管理工作带来的沉重负担。国外有些实验室已建立小鼠冷冻胚胎库，证明这是稳定、经济和安全地保存遗传资源的行之有效的方法。在我国，超低温冷冻保存家兔、羊和牛早期胚胎已经成功。曾有报道用两步法快速冷冻保存小鼠早期胚胎并在解冻后经培养证明有一定存活率，但未得到出生小鼠。本文报告超低温冷冻保存的小鼠8细胞期胚胎，在解冻并移植给受体母鼠后出生有正常繁殖能力的小鼠。材料和方法胚胎供体为使胚胎有毛色基因标记，使用了本所动物房昆明系二月龄雌鼠和C57BL／6品系雄鼠组合，杂交一代小鼠毛皮应均为黑色。雌鼠经孕马血清促性腺激素(长春生物制品所)和绒毛膜促性腺激素(上海生化制药厂)处理后，与雄鼠交配见栓后斗8小时回收胚胎。移植受体本所动物房昆明系二月龄雌鼠，和同一群体的结扎输精管的成熟雄鼠交配，见栓后48小时用作胚胎移植受体，结扎输精管雄鼠经证实无精子排出。冷冻方法在PBI溶液中回收胚胎jd，洗涤两次，移入含0．1毫升同种溶液的安凯瓶中。在0℃加入以PBS溶液配制的0~C2MDMSO(二甲基亚砜)0．1毫升。把安瓿瓶封口后，以1℃／分降温至一50C，此时用浸于液氮(一196~C)中的镊子夹安瓿瓶外壁，使瓶内液体晶化，然后用我们自己设计的简单降温装置以0．2—0．3℃／分降温到一80~(2，随即浸入液氮内保存。冷冻胚胎的解冻和移植从液氮内取出安瓿瓶，控制8~C／分左右升温到0~C，打开安瓿瓶封口，加入0．8毫升PBI来稀释冷冻保护剂。10分钟后用吸管回收胚胎，在PBI内洗涤后在解剖镜下观察形态，选择形态正常的胚胎供移植用。胚胎移植受体见栓时间与供体同步。受体经麻醉后开腹，用吸管把胚胎直接移人子宫，缝合腹坚后，单笼饲养观察。结果和讨论(一)冷冻和解冻过程对胚胎的影响。在15次实验中共回收冷冻胚胎331个。在解冻后形态完好的胚胎称形态正常胚胎共150个，占45．3g6。部分卵裂球损伤，但胚胎形态基本完好的称部分正常胚胎共15个，占4．5g6。胚胎卵裂球解体的166个，占50．2yS。保存时间B山Qj刀A"O：DeepFree2ingStOrageOtMOuse8—ceLl'EmbryOS1)感谢钱民理、摩建中、谭平平和张杰同志给予的帮助。本文于1985年?月真y日收到。

文章来源：《植物遗传资源学报》 网址: http://www.zwyczyxbzz.cn/qikandaodu/2020/1028/404.html

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